به وبلاگ پروتئومیکس خوش آمديد

عضويت در وبلاگ
منوي اصلي
صفحه نخست
پست الکترونيک
آرشيو مطالب
فهرست مطالب وبلاگ
پروفایل
موضوعات
کروماتوگرافی
ژل فیلتراسیون
افینیتی کروماتوگرافی (تمایلی)
آیون اکس چنج کروماتوگرافی (تبادلی)
الکتروفورز
SDS PAGE
الکتروفورز دو بعدی
PAGE
پروتئین ها
تخلیص پروتئین ها
ترسیب پروتئین ها
جرم مولکولی پروتئین ها
دیالیز پروتئین ها
اندازه گیری پروتئین ها
ایمنی هنگام کار (safty)
سئوالات متداول
ژورنال ها و مجلات علمی پروتئومیکس
خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس
طيف سنجي جرمي
اضافات

 

********************
* آگهی های ویژه *
 
شرکت های فروشنده لوازم
آزمایشگاهی می توانند در
این محل یعنی جایی که
روزانه صدها محقق به آن
سر می زنند ، یعنی درست
در بازار هدف ، تبلیغات خود
را به ما بسپارند .
ما به شما یک صفحه مجزا
برای تبلیغات می دهیم .
*                           *
********************

کسب درامد واقعی

آخرین مطالب
طراح قالب

Template By: NazTarin.Com

تبلیغات

محلول سازی نمونه ها برای الکتروفورز 2 بعدی

 

محلول سازی نمونه ها برای الکتروفورز 2 بعدی 
در نظر گرفتن ماهیت نمونه ، در انتخاب راهکار مناسب برای محلول ساختن پروتئینهای موجود در نمونه بسیار مهم است . در صورتیکه نمونه مورد نظر از منابع سلولی یا بافتی استخراج شود ، اولین قدم لیز سلولها و خارج کردن محتوای پروتئینی آنهاست . روشهای متفاوت مکانیکی و شیمیایی در لیز و متلاشی ساختن سلولها به کار گرفته می شود. این روشها ممکن است ، روشهای ملایمی چون شکست دیواره سلول باکتریها توسط آنزیم لایزوزایم (Lysozyme) ، یا روشهای خشنی چون استفاده از پرس فرانسوی (French press) برای متلاشی ساختن سلولهای مخمری باشد .
 
به هر حال در روش مطلوب محلول سازی برای الکتروفورز دو بعدی باید تمام پیوندهای غیر کووالانت در کمپلکسهای پروتئینی ، شکسته شده و تجمع پروتئینی به پلی پپتیدهای منفرد و محلول تبدیل شوند . به علاوه روش محلول سازی باید اجازه خارج ساختن موادی نظیر نمکها ، لیپیدها ، پلی ساکاریدها و اسیدهای نوکلوئیک را که می توانند باعث اختلال در جدا سازی توسط الکتروفورز دو بعدی شوند ، به وجود آورد . در نهایت پروتئین ها ی نمونه باید در حین روند الکتروفورز دو بعدی ، محلول باقی بمانند . به همین دلایل محلول شدن نمونه یکی از عوامل بسیار حساس برای جداسازی پروتئینها توسط الکتروفورز 2 بعدی است .
 
 
روشهای متلاشی ساختن سلولها
روشهای متلاشی ساختن سلولها به منظور استخراج محتوای پروتئینی آنها ، دامنه وسیعی از روشهای فیزیکی و شیمیایی ملایم تا خشن را در بر می گیرد . ممکن است لیز سلولی به طور مستقیم در تماس با بافر محلول سازی صورت پذیرد یا در مواردی ممکن است از امواج مافوق صوت (Sonication) برای این منظور استفاده شود . حتی در برخی موارد ترکیبی از روشهای مختلف برای نیل به استخراج کامل پروتئین های نمونه استفاده می گردد .
 
 متلاشی ساختن نمونه ها باید در سرما صورت پذیرد و نمونه مورد نظر در حین این روند باید روی یخ نگهداری شود . برای حفظ نمونه های پروتئینی از عملکرد پروتئاز های آزاد شده در حین متلاشی ساختن سلولها باید تمهیداتی در نظر گرفته شود . یکی از روشهای معمول متلاشی ساختن مستقیم سلولها در محلولهای لیز کننده ای است که سریعا پروتئاز ها و دیگر فعالیت های آنزیمی را متوقف کند . این محلولها عموما دارای مواد دناتوره کننده قدرتمندی هستند .
 
الف- روشهای متلاشی ساختن ملایم
این روشها معمولا زمانی به کار گرفته می شوند که نمونه مورد نظر حاوی سلولهایی است که به راحتی لیز می شوند ، سلولهایی نظیر سلولهای بافتی کشت داده شده ، سلولهای خونی و برخی از میکرو اورگانیسم ها . به علاوه از این روشها در مواردی هم که فقط تمرکز در بررسی یکی از اجزاء تحت سلولی است ، استفاده می شود . برای مثال می توان شرایطی را انتخاب کرد که فقط پروتئین های سیتو پلاسمیک آزاد شوند . یا میتوکندری های دست نخورده یا ارگانلهای دیگر توسط سانترفوژ تمایزی جدا شوند . برخی مواقع این روشها در ترکیب با یکدیگر استفاده می شوند . از روشهای ملایم متلاشی سازی سلولی می توان موارد زیر را نام برد .
 
1- لیز توسط دترجنت
دترجنت ها غشاء سلولی را حل می کنند و باعث لیز سلول و آزاد کردن محتوای آن می شوند . در بیشتر موارد سلولها مستقیما در بافر محلول سازی یا بافر خیساندن Rehydration Buffer  لیز می شوند . چرا که این بافرها همیشه دارای دترجنت هستند . رایج ترین روش برای محلول سازی پروتئین ها در الکتروفورز 2 بعدی همان روشی است که در ابتدا توسط Farrell در سال 1975 شرح داده شده است . در این روش از اوره 9.5 M ، 4% دترجنت غیر یونی NP40 ، 1% ماده احیاء کننده دی تیو تریتول (DDT) و 2% آمفولایت (Ampholyte) در محدوده مناسب استفاده شده است که به آن اصطلاحا بافر لیز کننده (Lysis Buffer) می گویند . در حالی که این روش در بسیاری از انواع نمونه ها به خوبی نتیجه می دهد ، نمی توان از آن به طور گسترده ای استفاده کرد . چرا که محلول سازی پروتئین های غشایی چالش این روش است . دترجنت های دو یونی (Witterionic) ، مانند CHAPS ، در محلول سازی پروتئین های غشایی بسیار مؤثرند . به خصوص که با غلظت 4% و در ترکیبی با مخلوطی از تیواوره 2M و اوره 8M استفاده شود . دترجنتهای سولفوبتائین خطی نظیر SB3-10 یا SB3-12 نیز معرفهای حل کننده مؤثری هستند ، اما با غلظتهای بالای اوره سازگار نیست . این مسئله با استفاده از غلظت 2% این معرفها در ترکیب با اوره 1M و تیواوره 2M و CHAPS 2% برطرف شده است . دترجنت سدیم دودسیل سولفات SDS نیز قادر است واکنشهای پروتئینی غیر کووالانت را بشکند و معرف بسیار مؤثری در محلول سازی پروتئینهای غشایی است . اما خاصیت آنیونیک این ماده استفاده از آن را در IEF دچار مشکل می نماید . در هر صورت می توان از SDS به عنوان یک روش پیش محلول سازی ، در مورد نمونه هایی که قرار است الکتروفورز 2 بعدی گردند ، استفاده کرد . در این روش ابتدا نمونه در محلول 1% SDS حل می شود و بعد با محلول های حل کننده عادی مانند بافر لیز کننده رقیق می شود . در اینجا هدف خارج کردن SDS از پروتئین ها و جایگزینی آن با دترجنت های دو یونی یا غیر یونی است ، تا پروتئین ها در وضعیت محلول باقی بمانند . نسبت پروتئین به دترجنت دو یونی یا غیر یونی 1:3 و نسبت SDS به این دترجنتها 1:8 است و این نسبت ها باید به دقت کنترل گردند ، تا محلول سازی کاملا انجام شود و در عین حال اثرات مخرب SDS بر روی IEF به حداقل برسد .
 
2- لیز اسموزی
این روش در مواردی که نیاز به جدا سازی اجزاء تحت سلولی است به کار گرفته می شود . سلولهای خونی و سلولهای کشت بافتی به این روش پاسخ مطلوبی می دهند . در این روش سلولها در محلولی هیپواسموتیک Hyposmotic قرار داده می شوند .
 
3- لیز توسط یخ زدن و ذوب کردن (Freez-thaw lysis)
در این روش سلولها در یک یا چند نوبت متوالی به سرعت در نیتروژن مایع ، یخ زده می شوند و سپس ذوب می شوند .
 
4- لیز آنزیمی
دیواره سلولی در بافتهای گیاهی ، سلولهای باکتریایی و قارچی را می توان با استفاده از آنزیم اختصاصی برداشت . و سپس سلول را لیز کرد . لایزوزایم برای سلولهای باکتریایی ، سلولاز و پکتیناز برای سلولهای گیاهی ، و لایتیکاز برای مخمرها در یک محلول ایزواسموتیک حل شده و مورد استفاده قرار می گیرد .
 
 
ب- روشهای متلاشی ساختن خشن
سلولهای موجود در بافت ها و سلولهایی که دیواره سلولی مستحکمی دارند ، به سهولت متلاشی نمی شوند و باید از این روشها برای لیز آنها استفده کرد . باید در هنگام استفاده از این روشها ، از ایجاد حرارت و کف ممانعت کرد .
 
 
1-    استفاده از امواج مافوق صوت
امواج صوتی تولید شده توسط یک سونیکاتور باعث لیز سلولها از طریق ایجاد برشهایی در دیواره سلولی می شوند . زمانیکه امواج مافوق صوت حداکثر تلاطم را در سیستم سلولی به وجود می آورند ، این برشها ایجاد می شوند .برای ممانعت از افزایش درجه حرارت سوسپانسیون سلولی و ایجاد کف ، ظرف سوسپانسیون سلولی در حمام یخ قرار داده می شود . و سونیکاسیون در مقاطع زمانی کوتاه مدت با فواصل زمانی معین صورت می پذیرد .
 
 
2-    پرس فرانسوی
ایجاد پارگی در دیواره سلولی در این روش به دلیل گذر دادن سوسپانسیون سلولی از منفذی بسیار کوچک تحت فشار بسیار زیاد است . این روش بسیار ساده ، کارآمد و سریع است و معمولا برای میکرو اورگانیسم های دارای دیواره سلولی به کار برده می شود .
 
 
3-    آسیاب کردن (Grinding)
 
 برخی از مواقع از سیستم هاون دستی مخصوص برای آسیاب سوسپانسیون سلولی یا بافت ها استفاده می شود . برای این منظور قطعه بافتی مورد نظر سوسپانسیون سلولی در نیتروژن مایع یخ زده می شود و با این هاون سلولی پودر می شوند . می توان برای بهبود این روش به مخلوط در حال هاون شدن ، شن یا آلومینا (Al2O3) اضافه کرد .
 
4-    هموژنیزه کردن
این روش ممکن است بصورت مکانیکی با کمک همزنهای برقی صورت گیرد که عموما برای نمونه های بافتی به کار گرفته می شود . استفاده از دانه های شیشه ای (Glass Bead) روش دیگر برای هموژنیزه کردن نمونه های سوسپانسیون سلولی است که با همزدن شدید سوسپانسیون حاوی این دانه ها ی شیشه ای در فواصل زمانی تکراری صورت می گیرد .

 

مرجع : استفاده شده از manual دستگاه IEF

 

 

*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***

www.ProteomicsIran.loxblog.ir

 

کسب درامد واقعی

[+] نوشته شده توسط ابوذر عسکری در دو شنبه 7 شهريور 1389برچسب:اوره,تیواوره,الکتروفورز 2 بعدی,Electrophoresis,2 Dimensional Electrophoresis,2DE,Lysozyme,DDT,NP40,CHAPS,SB3-10,SDS, , در ساعت 11:28 | |
ساختمان و خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس 4

 

Formaldehyde , Methanal

فرمالدئید ، متانال

 ساختمان ، ساختار و خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس ، فرمالدئید

 Tissue fixation; protein modification; zero-length crosslinking; protein–nucleic acid interactions

تثبیت کننده بافت ؛ تغییر دهنده پروتئین ؛ایجاد پیوند عرضی با کمترین طول؛ برهمکنش پروتئین و اسید نوکلئیک

**********************************************

 

ادامه تصاویر و خصوصیات موادی نظیر ،

Glutaraldehyde , Glycine

 مخصوص اعضاء در ادامه مطلب

 

 

 

*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***

www.ProteomicsIran.loxblog.ir

 

کسب درامد واقعی


ادامه مطلب
[+] نوشته شده توسط ابوذر عسکری در دو شنبه 14 مرداد 1389برچسب:خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس, در ساعت 16:0 | |
خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس 3

 

Coomassie Brilliant Blue G-250 , CI Acid Blue 90

 

G-250کوماسی بریلیانت بلو

 خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس ، G-250کوماسی بریلیانت بلو

Most often used for the colorimetric determination of protein

اغلب در سنجش رنگی تعیین پروتئین استفاده می شود.

**********************************************

 

ادامه تصاویر و خصوصیات موادی نظیر ،

Coomassie Brilliant Blue R-250 , Coomassie Brilliant Blue RL , Dichloromethane , Dithiothreitol , EDTA

مخصوص اعضاء در ادامه مطلب

 

 

 

 

*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***

www.ProteomicsIran.loxblog.ir

 

کسب درامد واقعی


ادامه مطلب
[+] نوشته شده توسط ابوذر عسکری در 7 مرداد 1389برچسب:خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس , در ساعت 11:19 | |
خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس 2

  

 Acrylamide , 2-propenamide

اکریل آمید ، 2-پروپن آمید

 خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس ، اکریل آمید ،

Monomer unit of polyacrylamide in gels , hydrogels, hard polymers ; environmental carcinogen ; fluorescence quencher.

 سرطان زا ، واحد سازنده (مونومر) پلیمر پلی آکریل آمید در ژل ها 

**********************************************

 

ادامه تصاویر و خصوصیات موادی نظیر ،

Ammonium Bicarbonate , Bromophenol Blue, Calcium Chloride, CHAPS , Chloroform 

مخصوص اعضاء در ادامه مطلب

 

 

 

*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***

www.ProteomicsIran.loxblog.ir

 

کسب درامد واقعی


ادامه مطلب
[+] نوشته شده توسط ابوذر عسکری در 14 تير 1389برچسب:خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس, در ساعت 9:38 | |
خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس

 

برای اینکه دید بهتری از واکنشهای بیوشیمی و شیمی برای محققین حاصل شود ، و محققین بتوانند ابتکار عمل بیشتری در طراحی داشته باشند ، لازم است با ساختمان مواد ، همچنین خصوصیات ، ویژگی ها و کاربردهای آنها بیشترآشنا شوند . به این خاطر بر آن شدیم این بخش را با این محتوا راه اندازی نماییم . از شما دوستان نیز برای این کار دعوت به عمل می آید ، تا در این امر مهم ما را یاری نمایند . برای این کار شکل ساختمان ماده شیمیایی ، خصوصیات و کاربرد های آن در پروتومیکس را ، برای ما ارسال نمایید ، تا ما آن را با نام خودتان در وبلاگ ، به نمایش گذاریم .  

  

  **********************************************

Acetaldehyde , Ethanal

استالدئید ، اتانال   

خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس ، استالدئید 

Manufacturing intermediate; modification of amino groups; toxic chemical

  عامل تأثیر بر روی گروه های آمینو ، سمی

 **********************************************

 

ادامه تصاویر و خصوصیات موادی نظیر ، 

Acetic Acid , Acetic anhydride , Acetone , Acetonitrile , Acetyl Chloride

 مخصوص اعضاء در ادامه مطلب

 

 

 

*** >>> استفاده از مطالب این وبلاگ بدون ذکر منبع جایز نیست <<< ***

www.ProteomicsIran.loxblog.ir

 

کسب درامد واقعی


ادامه مطلب
[+] نوشته شده توسط ابوذر عسکری در 7 تير 1389برچسب:خصوصیات و کاربردهای مواد شیمیایی پر مصرف در پروتومیکس, در ساعت 12:37 | |
صفحه قبل 1 ... 2 3 4 5 6 ... 16 صفحه بعد

درباره وبلاگ

پذیرش مقالات ,آموزش , مشاوره و شرکت در طرحهای تحقیقاتی و تولیدی و پایان نامه های دانشجویی در رابطه با تخلیص پروتئین ها با روشهایی مثل الکتروفورز کروماتوگرافی و غیره (وابسته به مؤسسه تحقیقات واکسن وسرم سازی رازی ، کرج)
آرشيو
دی 1390
شهريور 1390
تير 1390
ارديبهشت 1390
اسفند 1389
بهمن 1389
دی 1389
آبان 1389
شهريور 1389
مرداد 1389
تير 1389
خرداد 1389
ارديبهشت 1389
فروردين 1389
اسفند 1388
بهمن 1388
دی 1388
آذر 1388
آبان 1388
مهر 1388
شهريور 1388
مرداد 1388
تير 1388
خرداد 1388
آمار
روز بخير كاربر مهمان!
آمار بازديدها:
افراد آنلاين:
تعداد بازديدها:

مدير سایت :
ابوذر عسکری
لينكستان
کسب درامد واقعی از اینترنت (پول دیجیتال)
وب سایت فنی مهندسی آینده سازان
وبلاگ دانشجویان فیزیولوژی - دانشگاه فردوسی مشهد - دانشکده دامپزشکی
بیوتکنولوژی
پایگاه اطلاع رسانی بیوشیمی-پروتئومیکس
بیوانفورماتیك
مقدمه ای بر علوم هوافضا
STOPغیرمذهبی هاوارد نشوندSTOP





فال حافظ

قالب های نازترین

جوک و اس ام اس

زیباترین سایت ایرانی

جدید ترین سایت عکس

نازترین عکسهای ایرانی

بهترین سرویس وبلاگ دهی

وبلاگ دهی LoxBlog.Com


لينكدوني

کسب درامد واقعی از اینترنت (پول دیجیتال)
J. Chromatogr. A & B
Anal. Chem
Anal. Biochem
BMC Bioinformatics
Bioinformatics
Proteome
The Internet Journal of Genomics & Proteomics
Proteomics Virtual Journal
Omics: A Journal of Integrative Biology

آرشيو پيوندهاي روزانه


CopyRight| 2009 , proteomicsiran.LoxBlog.com , All Rights Reserved
Powered By Blogfa | Template By: LoxBlog.Com

--------- ----------